一、材料
1. 移液管圓筒(用于收集用過(guò)的移液管)
2. 消毒劑:次氯酸鹽,用清潔劑稀釋,**少應(yīng)含有 300 μg/g 的氯(如常規(guī)用的次氯酸鈉)
3. 清潔劑(如 7 X 或 Decon)
4. 不銹鋼籃子(收集清洗過(guò)的移液管然后晾干)
5. 無(wú)菌指示器
6. 移液管罐(在兩端分別有硅樹(shù)脂墊的正方形的鋁或不銹鋼的容器;正方形的罐子不會(huì)滾動(dòng))(Thermo Electron)
7. 無(wú)菌指示膠帶或塞(Bennett)
8. 滅菌烤箱:在有風(fēng)扇的情況下溫度可以達(dá)到 160°C,更適宜使用可記錄溫度計(jì)和易彎曲的探針。
二、操作步驟
收集和清洗
1. 將含有消毒劑的清潔劑倒入裝移液管的圓筒中。
2. 用后取掉吸頭,立即將移液管棄于圓筒中(圖 11.5)。
(a) 不要將移液管放在層流罩內(nèi),也不能讓它變干。
(b) 不要將用于吸瓊脂或硅樹(shù)脂(防水劑或防沫劑等)的移液管與普通移液管放在同一個(gè)圓筒中??捎靡淮涡缘囊埔汗芪铇?shù)脂,吸完瓊脂的移液管應(yīng)用加熱的自來(lái)水清洗,或者也可用一次性的移液管。
3. 移液管需浸泡過(guò)夜或**少 2 h。如果移液管的用量很多,應(yīng)不時(shí)將裝滿的圓筒取回,加清洗液前先浸泡 2 h。
4. 浸泡后通過(guò)壓縮空氣取出棉花塞。
5. 將移液管放入移液管清洗器中,**朝上(圖 11.4、圖 11.5,亦見(jiàn)圖 4.6)。
6. 用自來(lái)水通過(guò)清洗器的虹吸作用清洗移液管,**少 4 h,也可用帶有移液接頭的自動(dòng)清洗機(jī)來(lái)清洗,但不要加清潔劑。
7. 將閥門轉(zhuǎn)到去離子水(DW)或反向滲透水(ROW)處(圖 4.6),或者等自來(lái)水沖洗完畢后,再用 DW 或 ROW 灌滿、倒空,重復(fù)沖洗 3 次(在玻璃器皿清洗機(jī)中用自動(dòng)去離子水漂洗循環(huán))。
8. 將移液管放入移液管干燥機(jī)或烤箱中,**朝上。
9. 用棉花塞住管口(圖 11.6)。
10. 將移液管按大小分類并儲(chǔ)存在無(wú)塵環(huán)境中。
滅菌
1. 將移液管放入裝移液管的罐中(兩端貼上標(biāo)有移液管大小的標(biāo)簽是非常重要的)。
2. 每個(gè)罐子裝同一大小的移液管。
3. 少數(shù)幾個(gè)罐子裝 1 ml、2 ml、10 ml、25 ml 的移液管(例如,每個(gè)型號(hào)裝 4 個(gè))。
4. 在蓋子和罐子之間貼上無(wú)菌指示膠帶,并在膠帶上寫上日期。
5. 干熱滅菌,160°C 1 h。要盡可能少用膠帶,或換用溫度指示標(biāo)簽(Alpha Medical;Bennnet),此標(biāo)簽很小并不含爆炸性物質(zhì)。要在烤箱的中心檢測(cè)溫度,以保證這個(gè)**難到達(dá)的部位也能滿足**低的滅菌條件。要保證烤箱 中的罐子之間有一定的空隙,這樣可以使熱空氣流通(圖 11.7)。
6. 從烤箱中取出移液管,冷卻后將罐子拿到組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室。移液管可放置 48 h 以上,但要沿著罐子蓋周圍貼上膠帶。