二、將需滅菌的培養(yǎng)基、蒸餾水或其它器皿放入
滅菌鍋內(nèi)，關(guān)閉鍋蓋，檢查排氣閥、安全閥狀態(tài)，
三、打開電源，檢查參數(shù)設(shè)置是否正確，然后按下“work”鍵，
滅菌鍋開始工作；自動(dòng)派冷氣，到105℃時(shí)，底部排氣閥門自動(dòng)關(guān)閉，然后壓力開始上升；
四、壓力升** 0.15MPa（121℃）時(shí)，
滅菌鍋再次自動(dòng)放氣，然后開始記時(shí)，一般培養(yǎng)基滅菌20min，蒸餾水滅菌30min；
五、達(dá)到規(guī)定的滅菌時(shí)間后，關(guān)閉電源，打開放氣閥緩慢放氣；當(dāng)壓力指針降** 0.00MPa時(shí)，放氣閥無蒸汽排除時(shí)，方可開啟鍋蓋。 六、注意事項(xiàng)
1、汽未放盡前，不得開啟高壓鍋；
2、如果滅菌后的培養(yǎng)基在鍋內(nèi)不及時(shí)拿出，需在蒸汽放盡后將鍋蓋打開，切忌將培養(yǎng)基封閉在鍋內(nèi)過夜。
3、壓力表指針在0.05MPa以上時(shí)，不能過快放汽，以防止壓力急速下降，液體滾沸，從培養(yǎng)容器中溢出。
4、操作過程，請注意安全，小心燙傷。
高溫滅菌鍋的使用方法
1．shou先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。
2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。
3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。
4．用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力**所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。 5．滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降**0時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。
6．將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。
不過有幾點(diǎn)要注意的： 1.鍋內(nèi)必須要有充足的水。 2.鍋的氣密性一定要很好。
3.使用完后一定要放到適合溫度才可以打開。
超凈工作臺(tái)原理及使用方法
超凈臺(tái)的優(yōu)點(diǎn)是操作方便自如，比較舒適，工作效率高，預(yù)備時(shí)間短，開機(jī)10分鐘以上即可操作，基本上可隨時(shí)使用。在工廠化生產(chǎn)中，接種工作量很大，需要經(jīng)常長久地工作時(shí)，超凈臺(tái)是很理想的設(shè)備。超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，功率145～260W左右，將空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級(jí)濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，它除去了大于0.3μm的塵埃、真菌和細(xì)菌孢子等等。超凈空氣的流速為24～30m/min，這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，保持無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。但是萬一操作中途遇到停電，暴露在未過濾空氣中的材料便難以幸免污染。這時(shí)應(yīng)迅速結(jié)束工作，并在瓶上作出記號(hào)，內(nèi)中的材料如處于增殖階段，則以后不再用作增殖而轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)。如為一般性生產(chǎn)材料，因極其豐富也可棄去。如處于生根過程，則可留待以后種植用。
超凈臺(tái)電源多采用三相四線制，其中有一零線，連通機(jī)器外殼，應(yīng)接牢在地線上，另外三線都是相線，工作電壓是380V。三線接入電路中有一定的順序，如線頭接錯(cuò)了，風(fēng)機(jī)會(huì)反轉(zhuǎn)，這時(shí)聲音正?；蛏圆徽?，超凈臺(tái)正面無風(fēng)(可用酒精燈火焰觀察動(dòng)靜，不宜久試)，應(yīng)及時(shí)切斷電源，只要將其中任何兩相的線頭交換一下位置再接上，就可解決。三相線如只接入兩相，或三相中有一相接觸不良，則機(jī)器聲音很不正常，應(yīng)立即切斷電源仔細(xì)檢修，否則會(huì)燒毀電機(jī)。這些常識(shí)應(yīng)在開始使用超凈臺(tái)時(shí)就向工作人員講解清楚，免除不應(yīng)造成的事故與損失。
超凈臺(tái)進(jìn)風(fēng)口在背面或正面的下方，金屬網(wǎng)罩內(nèi)有一普通泡沫塑料片或無紡布，用以阻攔大顆粒塵埃，應(yīng)常檢查、拆洗，如發(fā)現(xiàn)泡沫塑料老化，要及時(shí)更換。除進(jìn)風(fēng)口以外，如有漏氣孔隙，應(yīng)當(dāng)堵嚴(yán)，如貼膠布，塞棉花，貼膠水紙等。工作臺(tái)正面的金屬網(wǎng)罩內(nèi)是超級(jí)濾清器，超級(jí)濾清器也可更換，如因使用年久，塵粒堵塞，風(fēng)速減小，不能保證無菌操作時(shí)，則可換上新的。
超凈臺(tái)使用壽命的長短與空氣的潔凈程度有關(guān)。在溫帶地區(qū)超凈臺(tái)可在一般實(shí)驗(yàn)室使用，然而在熱帶或亞熱帶地區(qū)，由于大氣中含有高量的花粉，或多粉塵的地區(qū)，超凈臺(tái)則宜放在較好的有雙道門的室內(nèi)使用。任何情況下不應(yīng)將超凈臺(tái)的進(jìn)風(fēng)罩對(duì)著開敞的門或窗，以免影響濾清器的使用壽命。 #p#分頁標(biāo)題#e#
無菌室應(yīng)定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵和消毒，用2%新潔爾滅抹拭臺(tái)面和用具(70%酒精也可)，用福爾馬林(40%甲醛)加少量高錳酸鉀定期密閉熏蒸，配合紫外線滅菌燈(每次開啟15分鐘以上)等等消毒滅菌手段，以使無菌室經(jīng)常保持高度的無菌狀態(tài)。接種箱內(nèi)部也應(yīng)裝有紫外線燈，使用前開燈15分鐘以上照射滅菌，但凡是照射不到之處仍是有菌的。在紫外線燈開啟時(shí)間較長時(shí)，可激發(fā)空氣中的氧分子締合成臭氧分子，這種氣體成分有很強(qiáng)的殺菌作用，可以對(duì)紫外線沒有直接照到的角落產(chǎn)生滅菌效果。由于臭氧有礙健康，在進(jìn)入操作之前應(yīng)先關(guān)掉紫外線燈，關(guān)后十多分鐘即可入內(nèi)。
在超凈工作臺(tái)上亦可吊裝紫外線燈，但應(yīng)裝在照明燈罩之外，并錯(cuò)開照明燈平行排列，這樣在工作時(shí)不妨礙照明。若將紫外線燈裝入照明燈罩(玻璃板)里面，這是毫無用處的，因?yàn)樽贤饩€不能穿透玻璃，它的燈管是石英玻璃，而不是硅酸鹽玻璃制成的。
接種室內(nèi)力求簡潔，凡與本室工作無直接關(guān)系的物品一律不能放入，以利保持無菌狀態(tài)。接種室內(nèi)的空氣與外界空氣應(yīng)**隔jue，預(yù)留的通氣孔道應(yīng)盡量密閉。通氣孔道可設(shè)上下氣窗，氣窗面積宜稍大，需覆上4層紗布作簡單濾塵。在**工作之后，可開窗充分換氣，然后再予以密閉?？傊?，既要清潔無塵無菌，又要空氣新鮮，適宜工作。覆在通氣窗上的紗布應(yīng)經(jīng)常換洗。但是上述種種措施只是理想的設(shè)計(jì)方案，往往不易全面做到，其實(shí)只要嚴(yán)格無菌操作手續(xù)，在門窗敞開的室內(nèi)，有一超凈臺(tái)的保護(hù)，接種的污染率仍可控制在生產(chǎn)上可以容忍的水平。
