1、器材

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿（6套一包），手提式高壓蒸汽菌鍋等。2、操作步驟

1．shou先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

2．放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。

3．加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。

4．用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力**所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌。

5．滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降**0時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。

6．將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，經(jīng)檢查若無雜菌生長(zhǎng)，即可待用。

稀釋倒平板法

先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000…），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻**45℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時(shí)間即可出出菌落。如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。倒平板的兩種方法持皿法

⑴將若干無菌培養(yǎng)皿疊放在左側(cè)，便于拿取。

⑵點(diǎn)燃煤氣燈，將火焰調(diào)到適中（空氣不要太大，以免氣流過急）。

⑶倒平板時(shí)，先用左手握住三角瓶的底部，傾斜三角瓶，用右手旋松棉塞，然后用右手的小指和手掌邊緣夾住棉塞并將它拔出（切勿將棉塞放在桌面上），隨之將瓶口周緣在火焰上過一下（不可灼燒，以防爆裂，以殺死可指沾在瓶口外的雜菌。然后將三角瓶從左手傳**右手中（用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部），在這操作過程中瓶口應(yīng)保持在離火焰2~3處，瓶口始終向著火焰。左手拿起一套培養(yǎng)皿，用中指、無名指和小指托住培養(yǎng)皿底部，用食指和大拇指夾住皿蓋并開啟一縫，恰好能讓三角瓶伸入，隨后倒出培養(yǎng)基。一般約倒入12ml的培養(yǎng)基即可鋪滿整個(gè)皿底。蓋上皿蓋，置水平位置等凝。然后再將三角瓶移**左手，瓶口再次過火并塞緊棉塞。

平板培養(yǎng)基的冷凝方法有兩種，一種是將平板一個(gè)個(gè)攤開在桌面上冷凝，另一方法是將幾個(gè)平板疊在一起冷凝。前者冷凝速度較快，在室溫較高時(shí)采用；而后者冷凝速度較慢，可在室溫較低時(shí)采用，其優(yōu)點(diǎn)是形成冷凝水少，尤其適用于平板劃線等的需要。

疊皿法

此法步驟與持皿法基本相同。不同點(diǎn)是左手不必持培養(yǎng)皿，而是將培養(yǎng)皿疊放在煤氣燈的左側(cè)并靠近火焰，用右手拿住三角瓶的底部，左手的掌背對(duì)著瓶口，用小指與無名指夾住瓶塞，將其拔出，隨即使瓶口過火，同時(shí)用左手開啟**上面的皿蓋，倒入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋即移**水平位置待凝。再依次倒下面的平板。在操作過程中，瓶口應(yīng)向著火焰保持傾斜狀，以防空氣中微生物的污染。